微生物實驗報告

微生物實驗報告（通用14篇）

　　在當(dāng)下這個社會中，越來越多人會去使用報告，報告成為了一種新興產(chǎn)業(yè)。寫起報告來就毫無頭緒？以下是小編收集整理的微生物實驗報告，希望能夠幫助到大家。

　　微生物實驗報告 1

　　實驗?zāi)康模?/strong>

　　（1）了解培養(yǎng)基的配置原理和方法，掌握分離培養(yǎng)微生物的有關(guān)準(zhǔn)備工作。

　　（2）掌握高壓滅菌方法及原理

　　實驗原理：

　　（1）培養(yǎng)基的制備原理：

　　培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。

　　從營養(yǎng)角度分析：

　　營養(yǎng)：碳源、氮源、能源、生長素、水分和無機鹽等；適宜的酸堿度(pH值)和一定緩沖能力；一定的氧化還原電位；合適的滲透壓。

　　瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì)，是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反復(fù)融化，其凝固性降低。

　　（2）濕熱滅菌原理——高壓蒸汽滅菌

　　在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

　　實驗材料與方法

　　配制培養(yǎng)基所需器材

　　實驗設(shè)備：高壓蒸汽滅菌器。

　　實驗器材：500ml三角燒瓶、藍蓋瓶、5ml刻度吸管、培養(yǎng)基、天平、砝碼、稱量紙、藥勺、500ml、100ml量筒、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐、平皿、剪刀等。

　　培養(yǎng)基等集中放講臺前高壓桶內(nèi)，送到洗刷室統(tǒng)一高壓滅菌條件及注意事項

　　高壓滅菌條件：121.3℃，15min。含糖培養(yǎng)基113℃，15min。

　　倒平板電爐加熱滅菌好的培養(yǎng)基打開平皿包裝倒平板（10塊）

　　注意事項：空氣環(huán)境無菌（應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)）。

　　a.在酒精燈火焰處，傾斜打開瓶口。

　　b.瓶口要過火焰。

　　c.左手掀開平皿小口。

　　d.傾注滿皿底再多一點，約10ml（7cm直徑平皿）。

　　e.推放一邊要輕緩，不能晃起瓊脂掛壁，易在培養(yǎng)過程中污染雜菌。

　　f.完全凝固再翻轉(zhuǎn)平板放塑料筐內(nèi)，4℃?zhèn)溆谩?/p>

　　分析與討論

　　（1）如何證明培養(yǎng)基滅菌是否徹底?

　　把滅菌后的培養(yǎng)基按滅菌鍋內(nèi)的不同位置，每處抽取數(shù)管(瓶)，標(biāo)上記號，置25℃～30℃培養(yǎng)一周左右進行檢查。如果培養(yǎng)基沒有什么變化，說明滅菌效果良好；如果某一位置的培養(yǎng)基出現(xiàn)了雜菌菌落，可能是擺放的太緊，導(dǎo)致蒸汽不暢，或鍋的結(jié)構(gòu)不合理等原因所致，應(yīng)根據(jù)上述情況進行改進；如果大部分或全部菌種瓶都出現(xiàn)雜菌，說明滅菌溫度或滅菌時間不夠，應(yīng)提高壓力或延長滅菌時間。經(jīng)過幾次檢驗都證明能徹底滅菌后，以后按同樣條件滅菌的'則不必進行檢查。

　　經(jīng)過幾次檢驗都證明能徹底滅菌后，以后按同樣條件滅菌的則不必進行檢查。

　　（2）為什么說消毒與滅菌是微生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)必不可少的基本知識?由于病原生物廣泛存在于自然界，可通過不同途徑和媒介進入人體，引起感染或造成疾病流行。因此，殺滅或清除存在于體外傳播媒介上的病原生物，對于切斷傳播途徑、預(yù)防和控制其感染具有重要意義。自古以來，人們就利用煮沸、火燒、日曬等方法殺滅或去除微生物，達到預(yù)防疾病的目的。實際上，除了在臨床醫(yī)療實踐中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物學(xué)實驗室、食物保存、飲水凈化、藥品與生物制品生產(chǎn)等過程中都需要避免微生物的污染。

　　微生物實驗報告 2

　　實驗?zāi)康呐c要求：

　　掌握霉菌與酵母菌的接種與培養(yǎng)方法。

　　實驗原理：

　　接種是微生物實驗及科學(xué)研究中一項基本操作技術(shù)。根據(jù)實驗?zāi)康暮鸵�求，選擇合適的接種工具與接種方法，接種工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、接種鉤、吸管、滴管、棉簽等。常用接種方法有：斜面接種，液體接種，穿刺接種，平板接種和固體接種。接種的關(guān)鍵是無菌操作。

　　無菌操作的原則：在酒精燈火焰旁進行，所有器皿均須嚴(yán)格消毒，培養(yǎng)基應(yīng)事先做無菌試驗，接種工具使用前后須經(jīng)火焰燒灼滅菌，棉塞不能亂放，始終夾在手指中。在培養(yǎng)四大類微生物時應(yīng)注意選擇適宜的培養(yǎng)條件。多數(shù)細菌為專性需氧菌與兼性需氧菌，少數(shù)為厭氧菌。多數(shù)食品腐敗菌和工業(yè)用菌種，以及人和動物病原菌的最適生長溫度為37℃，并且在近中性（PH6.5～7.5）條件下生長良好。多數(shù)放線菌為好氧菌，少數(shù)為厭氧菌，最適生長溫度為28～30℃，多數(shù)適宜在偏堿性環(huán)境中生長（PH7.5～8.5）。

　　實驗材料與方法

　　（1）實驗材料：實驗設(shè)備：溫箱。

　　實驗器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假絲酵母、新生隱球酵母菌、細黃鏈霉菌、PDA平板、高鹽察氏平板、高氏合成I號平板、塑料筐、20%甘油水溶液、鑷子、接種鏟、無菌蓋玻片、無菌濾紙、無菌載玻片、石棉網(wǎng)、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐等。

　　（2）實驗方法：平板接種：毛霉→PDA平板（點植法）

　　啤酒酵母→PDA平板（五區(qū)分離劃線法）青霉、曲霉→PDA平板（連續(xù)劃線法）

　　小室載玻片培養(yǎng)法：

　　1、取滅菌后小室平皿。

　　2、取無菌PDA瓊脂薄層平板，用鑷子夾住蓋玻片切割成0.5～1.0cm2的瓊脂塊，并將其移至培養(yǎng)小室中的載玻片上，制作過程注意無菌。

　　3、用接種環(huán)取少量霉菌的孢子接種于培養(yǎng)基四周，用無菌鑷子

　　將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上，并滅菌的20%甘油（用于保持濕度），蓋上皿蓋，標(biāo)記，置28～30℃培養(yǎng)3～5d

　　糧食產(chǎn)品的平板接種：

　　1.取糧食樣品20g，放入無菌燒杯，加無菌水洗滌，反復(fù)10次，棄去水后，將糧粒倒于平皿內(nèi)備用

　　2.鑷子取糧食種入PDA瓊脂內(nèi)，每皿可接種5-10粒。

　　放線菌的接種：取細黃鏈霉菌劃線法接種，在接種的劃線處，無

　　菌操作斜插入蓋玻片數(shù)張。

　　注意事項：

　　1.空氣環(huán)境無菌（應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)）

　　2.在酒精燈火焰處，傾斜打開瓶口。

　　3.接種環(huán)使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。

　　4.接種環(huán)使用后，先在火焰周圍把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。

　　5.金屬桿快速通過火焰2－3次，殺滅表面微生物

　　分析與討論

　　1、糧食中產(chǎn)毒真菌的種類及產(chǎn)生毒素？

　　青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、細黃鏈霉菌（放線菌）青霉素、絲生毛霉素、黃曲霉素、根霉素、白念菌素。細黃鏈菌素

　　2、常用霉菌培養(yǎng)基有哪些？

　　馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基

　　豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）瓊脂培養(yǎng)基察氏培養(yǎng)基

　　3、霉菌的接種方法有何不同？為什么？

　　（1）連續(xù)劃線法（青霉、曲霉）

　　青霉與曲霉為局限性生長的霉菌。應(yīng)采用連續(xù)劃線接種法接種。

　　（2）點植法（根霉、毛霉）

　　根霉與毛霉生長區(qū)域比較大，應(yīng)采用點植法。

　　（3）小室載玻片培養(yǎng)法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）

　　實驗三霉菌的制片與形態(tài)觀察

　　實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法；

　　了解四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。了解放線菌的基本形態(tài)特征。

　　實驗原理：霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多（約為3-10μm），常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以制標(biāo)本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液，用此染液做霉菌制片的特點是細胞不變形，具有殺菌、防腐作用，不易干燥，能保持較長時間，能防止孢子四處飛散，棉蘭具有一定的染色作用，染液的藍色能增大反差。

　　實驗材料：

　　（一）菌種：在馬鈴薯瓊脂平板上培養(yǎng)3—4天的'青霉(Penicilliumsp.)、曲霉(Aspergillussp.)、毛霉（Mucorsp.）、根霉；

　　（二）器材及用具：鑷子、載玻片、蓋玻片、顯微鏡。

　　實驗方法：

　　（一）直接制片觀察

　　于潔凈載玻片上，用鑷子取霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲，然后小心地蓋上蓋玻片。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡

　　（二）小室培養(yǎng)觀察

　　將載玻片直接放低倍鏡下觀察，再換高倍鏡觀察。

　　觀察原則：

　　毛霉：用低倍鏡觀察孢子囊梗、囊軸等。用高倍鏡觀察孢子囊孢子的形狀、大小。

　　根霉：菌絲、孢子同毛霉，注意觀察有無假根。

　　曲霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無隔膜，分生孢子著生位置，辨認(rèn)分生孢

　　子梗、頂囊、小梗和分生孢子。

　　青霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生孢子的形狀等。

　　實驗結(jié)果：

　　分析與討論：

　　青霉和曲霉的形態(tài)有哪些異同？

　　青霉常分布在霉腐變質(zhì)的水果、蔬菜、糧食和皮革等物體上，菌體直立菌絲的頂端長有掃帚狀的結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)的每一個分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青綠色，進行孢子生殖。

　　曲霉廣泛分布在谷物、空氣和土壤中，曲霉直立菌絲的頂端膨大成球狀，球狀結(jié)構(gòu)的表面放射狀地生有成串的孢子，孢子隨曲霉種類的不同而呈黃色、橙色或黑色。

　　從皮膚取材查真菌如何檢查？

　　微生物實驗報告 3

　　為加強醫(yī)院病原微生物實驗室生物安全管理工作，確保醫(yī)院平安目標(biāo)的實現(xiàn)，我院檢驗科根據(jù)xx省《病原微生物實驗室生物安全管理條例》的相關(guān)內(nèi)容，對醫(yī)院實驗室安全管理工作進行了自查，對涉及病原微生物菌（毒）種及樣本的人員進行了培訓(xùn)，提高他們生物安全的意識，掌握必要的生物安全知識。

　　一、實驗室生物安全管理工作、各項規(guī)章制度的運行情況

　　醫(yī)院檢驗科根據(jù)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》的相關(guān)規(guī)定進行學(xué)習(xí)，并定期對有關(guān)生物安全各項規(guī)章制度的運行情況進行檢查，對存在的問題及時進行整改。實驗室所從事的實驗活動均嚴(yán)格遵守有關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)和實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程，并指定專人監(jiān)督檢查實驗室技術(shù)規(guī)范和操作規(guī)程的落實情況。同時，對檢查情況進行詳細記錄，定期召開會議討論工作中發(fā)現(xiàn)的問題，及時糾正。

　　二、病原微生物菌（毒）種的管理及運輸

　　因各方面條件限制我院現(xiàn)不能開展病原微生物實驗室生物的檢查，根據(jù)通知要求積極組織相關(guān)人員主要學(xué)習(xí)了：病原微生物實驗室菌（毒）種的管理嚴(yán)格登記制度，收到菌（毒）種后立即進行編號登記，詳細記錄菌（毒）種的名稱、來源、特性、用途、批號、傳代日期、數(shù)量。在菌（毒）種的管理，安全保衛(wèi)制度，安全保衛(wèi)措施，保管過程中，傳代、分發(fā)及使用，均應(yīng)及時登記，定期核對庫存數(shù)量。菌（毒）種在進行銷毀時，滅菌指示標(biāo)志，滅菌效果，同時做好銷毀登記等內(nèi)容。

　　三、實驗室生物安全突發(fā)事件的處理工作

　　在此次自檢中，我院實驗室對以前制訂的'處置意外事件的應(yīng)急指揮和處置體系，進一步進行了修訂，使之能滿足實際工作的需要。

　　針對當(dāng)發(fā)生自然災(zāi)害（如地震、水災(zāi)等）或設(shè)施出現(xiàn)故障時，我們制定了可能遇到的緊急情況及其處理原則。

　　同時規(guī)范了菌（毒）種外溢在臺面、地面和其他表面的的處理原則、皮膚刺傷（破損）的處理原則、離心管發(fā)生破裂的處理原則并建立了意外事故報告制度。

　　在實驗室的顯著位置張貼了實驗負責(zé)人、實驗室工作人員、消防、醫(yī)院、公安、工程技術(shù)人員、水、電氣維修部門電話。

　　四、提高意識，加強學(xué)習(xí)

　　組織檢驗人員對《病原微生物實驗室生物安全管理條例》進行全面系統(tǒng)的學(xué)習(xí)，同時加強了實驗室的準(zhǔn)入制度的管理，標(biāo)明實驗室類型、負責(zé)人及其聯(lián)絡(luò)方式。加強了個人安全防護，并要求檢驗人員嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn)的操作規(guī)程進行檢驗。

　　通過這次對微生物實驗室生物安全管理工作自查，提高了全體檢驗人員對微生物實驗室生物安全管理工作重要性的認(rèn)識，加強管理，采取有效措施，確保實驗室工作安全。

　　微生物實驗報告 4

　　實驗名稱：

　　用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細胞質(zhì)流動

　　一、實驗?zāi)康?/strong>

　　1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。

　　2.觀察高等植物的葉綠體在細胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布

　　二、實驗原理

　　高等植物的葉綠體呈橢球狀，在不同的光照條件下，葉綠體可以運動，改變橢球體的方向，這樣既能接受較多的光照，又不至于被強光灼傷。在強光下，葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源;在弱光下，葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此，在不同光照條件下采集的葫蘆蘚，其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細胞中的細胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài)，觀察細胞質(zhì)的流動，可以用細胞質(zhì)基質(zhì)中的.葉綠體的運動做為標(biāo)志。

　　三、材料用具

　　蘚類的葉，新鮮的黑藻，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滴管，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，鉛筆

　　四、實驗過程（見書Ｐ30）

　　1．制作蘚類葉片的臨時裝片

　　2．用顯微鏡觀察葉綠體

　　3．制作黑藻葉片臨時裝片

　　4．用顯微鏡觀察細胞質(zhì)流動

　　物理實驗報告 ·化學(xué)實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板

　　五、討論

　　1．細胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動，為什么？

　　2．葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系？

　　3．植物細胞的細胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài)，這對于活細胞完成生命活動有什么意義？

　　4．用鉛筆畫一個葉片細胞，標(biāo)出葉綠體的大致流動方向。

　　微生物實驗報告 5

　　一、實驗?zāi)康?/strong>

　　1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）的配制方法。

　　2、學(xué)習(xí)各種無菌操作技術(shù)，并用此技術(shù)進行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。

　　3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。

　　4、認(rèn)識為微生物存在的普遍性，體會無菌操作的重要性。

　　5、掌握分離產(chǎn)淀粉酶微生物的試驗方法和步驟，了解產(chǎn)淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。

　　二、實驗原理

　　土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實驗從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的微生物，應(yīng)該取那些富含產(chǎn)淀粉酶的微生物的土樣。從復(fù)雜的微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有

　　1、簡單單細胞挑取法

　　2、平板分離法和稀釋涂布平板法

　　此次實驗采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結(jié)合，該方法操作簡單，普遍用于微生物的分離與純化。

　　其原理包括：

　　1)稀釋后的細胞懸液圖不在平板上可以分離得單個菌株

　　2)在適合于待分離微生物的生長條件（如營養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等）下培養(yǎng)微生物，或加入某種抑制劑造成只利于待分離微生物的生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。

　　3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落可以是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。

　　以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細菌，能產(chǎn)淀粉酶的細菌能生長，且菌落周圍出現(xiàn)透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產(chǎn)淀粉酶微生物被分離出來。本實驗采用透明圈檢驗法檢測培養(yǎng)物中是否有產(chǎn)淀粉酶微生物的生長。

　　三、實驗儀器及試劑

　　1、器材：

　　培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、天平、濾紙、pH試紙等。

　　2、試劑：

　　配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料（牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。

　　3、土樣：

　　取自貴州大學(xué)農(nóng)生樓后土壤10g，地下10cm左右。

　　四、實驗步驟：

　　1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：

　　1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml（用于11個平皿和7支試管斜面）牛肉膏0.5%，2g

　　蛋白胨1%，4g

　　NaCl0.5%，2g

　　瓊脂2%，8g

　　淀粉0.5%，2g

　　pH，7.0~7.2

　　（2）無菌水的制備

　　分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。

　　（3）器皿的準(zhǔn)備

　　將刻度吸管用報紙包扎，培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。

　　2）倒11個平板和7支試管斜面，包扎，0.1Mp、121℃、滅菌30min.

　　2、制備土壤稀釋液：

　　稱取土樣10g，放入盛有250ml無菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無菌操作），加入另一盛有9ml無菌水的'試管中，混合均勻，以此類推分別制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。

　　3、涂布培養(yǎng)：

　　0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對象，將其分別涂布在3個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，共6個培養(yǎng)基，標(biāo)號，37°C溫箱培養(yǎng)48h。

　　4、選取目的菌株：

　　兩天后對土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進行觀察，并取兩個菌落形態(tài)完全一致的分散的單個菌落，對其中一個噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈，如果出現(xiàn)透明圈說明此菌株產(chǎn)淀粉酶，是目的菌株，記錄細菌明顯的性狀。

　　微生物實驗報告 6

　　實驗名稱：

　　觀察洋蔥表皮細胞。

　　實驗?zāi)康模?/strong>

　　1、學(xué)習(xí)制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本。

　　2、學(xué)會使用顯微鏡觀察洋蔥表皮，用圖畫記錄觀察到的洋蔥表皮細胞。

　　3、對比用肉眼、放大鏡、顯微鏡看到的洋蔥表皮各有什么不同。

　　實驗重點：

　　用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。

　　實驗難點：

　　正確使用顯微鏡。

　　實驗準(zhǔn)備：

　　分組實驗器材：顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。 實驗過程：

　　一、導(dǎo)入課題

　　出示洋蔥。問：如果從它的內(nèi)表皮上揭下一塊，用顯微鏡來觀察能看到些什么呢？（板書課題）

　　二、制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本

　　1、師講解并演示制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本的方法與步驟。

　　（1）在一個干凈的玻璃載片中間滴一滴清水；

　　（2）用小刀在洋蔥鱗葉片內(nèi)壁劃一個“井”字，用鑷子取下“井”中洋蔥內(nèi)表皮放到載玻片的水滴中央，注意標(biāo)本要平展開，不能折疊；

　　（3）用蓋玻片傾斜著蓋到標(biāo)本上面，放蓋玻片時，先放一端，再慢慢放下另一端，注意不要有氣泡。如水不足，可沿蓋玻片邊緣滴加；若水分過多，可用吸水紙吸掉；

　　（4）從蓋玻片的一邊滴一滴稀釋的碘酒，并把玻片微微傾斜，再在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸掉多余的水；

　　（5）洋蔥表皮玻片標(biāo)本做成可進行觀察。

　　2、學(xué)生以組為單位自制玻片標(biāo)本（最好制三份裝片，便于下面的對比觀察），教師巡視指導(dǎo)（教育學(xué)生注意安全）。

　　三、觀察洋蔥表皮細胞

　　1、先用肉眼觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫在科學(xué)記錄本上。

　　2、再用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫到科學(xué)記錄本上。

　　3、學(xué)生交流用肉眼和放大鏡分別觀察到什么？它們有何不同？

　　4、利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。

　　（1）、出示顯微鏡，引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識顯微鏡，簡介各部分的名稱、功能及使用方法，學(xué)生每5人一組操作熟悉顯微鏡。

　　（2）、各組利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。

　　（3）、學(xué)生觀察、記錄、描畫洋蔥表皮細胞。教師巡視指導(dǎo)，各組的實驗組長監(jiān)督組員操作是否規(guī)范，要求每個人都要操作、都要觀察，并將觀察結(jié)果進行交流。組長將大家在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)畫到科學(xué)記錄本上。

　　5、全班交流在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)。

　　（1）各組推薦發(fā)言代表談自己的.發(fā)現(xiàn)。

　　（2）各組將所畫的觀察結(jié)果向全班展示。

　　（3）交流討論評價。

　　6、師小結(jié)：我們發(fā)現(xiàn)放大鏡比肉眼、顯微鏡比放大鏡看到的細節(jié)更多，更清楚。我們發(fā)現(xiàn)洋蔥表皮是由一個個比較規(guī)則的多邊形組成的，而且大多呈長方形，外為細胞壁，內(nèi)為無色細胞質(zhì)和細胞核。洋蔥表皮上的一個個小房間似的結(jié)構(gòu)，就是洋蔥的細胞。（師一邊描述一邊畫洋蔥細胞簡圖）

　　四、實驗結(jié)束。

　　回收實驗器材，整理實驗桌。

　　微生物實驗報告 7

　　一、實驗名稱：

　　用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞

　　二、實驗材料：

　　顯微鏡、洋蔥表皮細胞切片，及其他細胞裝片。

　　三、實驗步驟：

　　1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座，把顯微鏡向著光放在實驗臺上。

　　2、對光：轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔。

　　3、調(diào)節(jié)載物臺下的反光鏡，從目鏡往下看，能看見亮的光圈。

　　4、觀察：調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，把所要觀察的洋蔥表皮切片放在載物臺上，用壓片夾夾住，標(biāo)本要正對通光孔的中央。

　　5、左眼向目鏡內(nèi)看，同時轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋等，直到看清切片上的細胞為止，最后整理器材。

　　四、使用注意事項：

　　1、取送顯微鏡時，應(yīng)右手握住鏡臂，左手托住鏡座，輕拿輕放。

　　2、鏡檢時，坐姿端正，一般用左眼觀察物象，用右眼看著實驗報告紙畫圖。兩眼須同時睜開。

　　3、切忌一面從目鏡進行觀察，一面使鏡筒下降，這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。

　　4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時，切勿使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓壞標(biāo)本，損壞物鏡。

　　5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒，移開鏡頭后再取出玻片標(biāo)本，以免取玻片時擦損鏡頭的鏡面。

　　五、實驗原理：

　　利用教學(xué)顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。

　　六、創(chuàng)新點：

　　在實驗過程中為學(xué)生提供多種細胞裝片，以供學(xué)生操作、觀察，增加了學(xué)生動手實驗的時間，使學(xué)生在實驗中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的'焦距的過程，從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。

　　微生物實驗報告 8

　　一、實驗?zāi)康?/strong>

　　通過本次實驗，我們希望深入了解微生物的基本特性，掌握微生物的分離、培養(yǎng)與觀察方法，為進一步研究微生物的應(yīng)用打下基礎(chǔ)。

　　二、實驗原理

　　微生物是一類個體微小、結(jié)構(gòu)簡單的生物，包括細菌、真菌、病毒等。本實驗主要利用微生物的繁殖特性，通過選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，將微生物分離出來并進行培養(yǎng)。通過顯微鏡觀察，我們可以了解微生物的形態(tài)、大小、染色反應(yīng)等特性。

　　三、實驗步驟

　　實驗準(zhǔn)備：選擇合適的培養(yǎng)基，如肉湯培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基等；準(zhǔn)備顯微鏡、接種環(huán)、滅菌鍋等實驗器材。

　　滅菌處理：將培養(yǎng)基和實驗器材進行高壓蒸汽滅菌，以消除雜菌干擾。

　　微生物分離：從樣本中提取微生物，采用稀釋法或劃線法將微生物接種到培養(yǎng)基上。

　　培養(yǎng)與觀察：將接種后的培養(yǎng)基放置在恒溫箱中，在適宜的溫度和濕度條件下進行培養(yǎng)。定期觀察微生物的生長情況，記錄生長特點。

　　顯微鏡觀察：選擇生長良好的菌落，用接種環(huán)取少量菌體，置于顯微鏡下觀察其形態(tài)、大小及染色反應(yīng)等特性。

　　數(shù)據(jù)記錄與整理：詳細記錄實驗數(shù)據(jù)，包括微生物的形態(tài)特征、生長情況等。整理數(shù)據(jù)并進行分析。

　　四、實驗結(jié)果與分析

　　經(jīng)過實驗，我們成功分離并培養(yǎng)了多種微生物，包括細菌、真菌等。通過顯微鏡觀察，我們記錄了各種微生物的形態(tài)特征，并對其進行了初步分類。以下是部分實驗結(jié)果的'數(shù)據(jù)表格和圖表記錄。

　　五、結(jié)論

　　通過本次實驗，我們掌握了微生物的分離、培養(yǎng)與觀察方法，了解了不同微生物的形態(tài)特征和生長特性。這些知識對于進一步研究微生物的應(yīng)用具有重要意義。在未來的研究中，我們可以利用這些知識探索微生物在生物工程、環(huán)境保護等領(lǐng)域的應(yīng)用價值。同時，本實驗也提高了我們的實踐操作能力和科學(xué)探究精神。

　　微生物實驗報告 9

　　一．觀察洋蔥表皮細胞

　　實驗?zāi)康模和ㄟ^觀察洋蔥表皮細胞，說明植物體是由細胞組成的實驗材料：：顯微鏡、洋蔥、鑷子、滴管、水、載玻片、針、蓋玻片、吸水紙、紗布。實驗步驟：

　　（一)制做臨時裝片。

　　（1）用紗布將載玻片、蓋玻片擦干凈。

　　（2）用液管在載玻片上滴一滴清水。

　　（3）用鑷子在洋蔥鱗片葉上撕下一小片表皮。

　　（4）將撕下的表皮放入載玻片上的水滴中，用針將其展開。

　　（5）用鑷子夾住蓋玻片，先將一邊接觸載玻片的水滴邊經(jīng)再慢慢把蓋玻片放平，制成臨時切片。

　　（4）在蓋玻片的翼側(cè)滴加稀碘液，用吸水紙從蓋玻片的另一側(cè)吸引，使染液浸潤標(biāo)本的全部。

　　（二）安裝臨時裝片：將臨時切片放到顯微鏡上，調(diào)整顯微鏡與臨時切片位置，直到可以觀察到清晰的圖像為止實驗圖像：

　　200倍800倍

　　實驗結(jié)論：洋蔥表皮是由無數(shù)細胞構(gòu)成的，有明顯的細胞核，細胞壁，細胞質(zhì)出現(xiàn)。

　　二．觀察人的口腔上皮細胞的實驗教案

　　1、學(xué)習(xí)要求：

　　1.制作和觀察人的口腔上皮細胞臨時裝片。

　　2.認(rèn)識人的口腔上皮細胞的基本結(jié)構(gòu)。

　　2、材料用具：

　　生理鹽水，稀碘液，消毒牙簽，滴管，紗布，鑷子，吸水紙，載玻片，蓋玻片，顯微鏡。

　　3、實驗方法和步驟：

　　1.用潔凈的紗布將載玻片和蓋玻片擦拭干。

　　2.在載玻片中央滴一滴生理鹽水。

　　3.用消毒牙簽在口腔內(nèi)側(cè)壁輕刮幾下放在生理鹽水中。

　　4.用鑷子夾起蓋玻片，使它的一邊先接觸載玻片上的水滴，再將蓋玻片緩緩放平蓋在水滴。

　　5.在蓋玻片的一側(cè)滴加幾滴稀碘液，用吸水紙在蓋玻片的另一側(cè)吸引，使碘液浸潤標(biāo)本的全部。

　　總結(jié)步驟：

　　擦-→滴-→取-→蓋-→染-→吸五、繪制人的口腔上皮細胞

　　三．測定某種食物中的能量

　　實驗?zāi)繕?biāo)一顆花生種子含有多少能量？

　　實驗器材或藥品 水

　　實驗探究過程 現(xiàn)象

　　分析及結(jié)論

　　1、在錐形瓶中裝30ml水

　　實驗前水溫：

　　2、把花生固定在解剖20℃、20℃、24℃

　　針上

　　試驗后水溫：

　　3、在酒精燈上點燃花73℃、78℃、68℃

　　4.2J生并盡快把花生放到錐

　　溫差：×51×4.2=6300J

　　形瓶下面 53℃、58℃、44℃ 、待花生完全燒完后，平均值：51.666℃

　　一顆花生種子約含有6300J

　　實驗結(jié)的能量論

　　四．探究饅頭在口腔中的變化實驗報告

　　一、問題的提出：取一塊饅頭放到口中咀嚼。口腔中的饅頭要經(jīng)過牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及與唾液的混合。細細品嘗這時的饅頭，你能嘗出一些甜味來。饅頭變甜是否與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的'分泌有關(guān)呢？如果有關(guān)，它們各起什么作用呢？饅頭變甜是否是淀粉發(fā)生了變化？

　　二、作出假設(shè)饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)。饅頭變甜是因為淀粉被唾液中的唾液淀粉酶分解成了帶有甜味的麥芽糖。在這個過程中，通過牙齒的咀嚼將饅頭嚼碎，舌的攪拌使饅頭碎屑與唾液充分混合。

　　三、制定計劃

　　（一）實驗原理

　　饅頭變甜應(yīng)該是成分中糖類發(fā)生變化。饅頭的主要成分是淀粉，因此本實驗利用淀粉遇碘變藍的特性，以及口腔中的溫度為37℃的常識。控制變量唾液，以及模擬牙齒的咀嚼作用和舌的攪拌作用。三支試管，兩個對照實驗。一支試管作為實驗組，另兩支試管作為對照組。如果模擬牙齒的咀嚼功能、舌的攪拌功能并加入唾液，滴入碘液后，實驗組的試管內(nèi)沒有變成藍色，說明饅頭中淀粉的變化與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)。如果變成藍色，則說明淀粉沒有被分解，饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌沒有關(guān)系。

　　（二）實驗變量的控制

　　兩個對照實驗。一個對照實驗的實驗變量是唾液，實驗組內(nèi)加入唾液2ml，對照組試管加入2ml清水。另一個對照實驗的實驗變量是饅頭塊的狀態(tài)：實驗組的饅頭塊用刀切碎，放入試管中并震蕩試管，對照組的饅頭塊不做任何處理，直接整塊放入試管中，并且不震蕩試管。

　　（三）實驗方案實驗材料用具：饅頭塊（三小塊等大）試管（三支）燒杯（三個）盛唾液的小燒杯滴管溫度計石棉網(wǎng)三腳架碘液小刀小木板

　　1.取新鮮的饅頭，切成大小相同的A、B、C三小塊。將A塊和B塊分別用刀細細地切碎，拌勻（模擬牙齒的咀嚼和舌的攪拌），C塊不做任何處理。

　　2.用涼開水將口漱凈，口內(nèi)含一塊消毒棉絮。約1分鐘之后，用干凈的鑷子取出棉絮，將棉絮中的唾液擠壓到小燒杯中。

　　3.取3支潔凈的試管，分別編上（1）、（2）、（3）號，然后做如下處理：

　　將A饅頭碎屑放入（1）號試管中，注入2ml唾液并震蕩試管；將B饅頭碎屑放入（2）號試管，注入2ml清水并震蕩試管；將C饅頭放入（3）號試管，不震蕩。將三支試管一起放入37℃左右的溫水中。4.5-10分鐘后，取出這三支試管，各滴加2滴碘液，搖勻。然后，觀察并記錄各試管中的顏色變化。四：實施計劃

　　按確定的探究計劃進行實驗，觀察實驗現(xiàn)象。可見，（1）號試管中沒有變成藍色；（2）號試管變成藍色；（3）號試管中的饅頭塊部分變成藍色。

　　五、分析實驗結(jié)果，得出結(jié)論

　　分析實驗現(xiàn)象，（1）號試管中滴入碘液后，沒有變成藍色，說明試管中已經(jīng)沒有淀粉，淀粉被唾液中的唾液淀粉酶分解成麥芽糖了，麥芽糖沒有遇碘變藍的特性，所以滴入碘液后不變藍。（2）號試管中加入的是清水和饅頭碎屑，水沒有消化淀粉的作用，因此，滴入碘液后，饅頭碎屑中淀粉遇碘變成藍色。（3）號試管中只有部分變成藍色，說明饅頭與唾液的接觸不充分，只有部分淀粉被分解。由此，得出結(jié)論：說明饅頭變甜與牙齒的咀嚼、舌的攪拌以及唾液的分泌都有關(guān)系。因為上述活動模擬了消化與唾液的分泌以及牙齒的咀嚼、舌的攪拌，（1）號試管中的饅頭接觸到了足量的唾液，并被消化。

　　微生物實驗報告 10

　　一、實驗?zāi)康模?/strong>

　　1、學(xué)會如何使用顯微鏡觀察細胞；

　　2、了解細胞的結(jié)構(gòu)；

　　3、學(xué)會制作臨時裝片。

　　二、實驗材料：

　　（實驗材料可換）松針、動物血液、動物神經(jīng)細胞永久裝片

　　三、實驗用具：

　　載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡（物鏡5X、10X、40X）

　　四、方法步驟：

　　1、制作松針的臨時切片：

　　（1）取干凈的載玻片一個平置于試驗臺上，用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。

　　（2）將土豆切成條狀（截面約：0.5X0.5cm)取兩條，將一根松針夾在兩個土豆條之間，用刀片削成盡量薄的薄片，削時，手腕不動，靠大臂帶動小臂移動刀片。切片數(shù)次。從中選取較薄的切片，置于載玻片的水滴上。

　　（3）從一側(cè)輕輕蓋上蓋玻片，不要產(chǎn)生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍的水滴，即完成臨時切片的制作。

　　2、觀察切片：

　　（1）取出顯微鏡，置于試驗臺上靠左的'位置，打開光源。

　　（2) 將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺上，調(diào)整載物臺位置，使蓋玻片對準(zhǔn)光源。

　　（3）使用5X物鏡觀察切片，使松針切片在視野中心，換成10X物鏡，觀察松針葉面橫切結(jié)構(gòu)。

　　（4）換成40X物鏡觀察，注意細胞及細胞內(nèi)物質(zhì)結(jié)構(gòu)，畫圖。

　　3、動物血液臨時裝片的制作及觀察（除了不用切片，其他類似）

　　4、 動物神經(jīng)細胞永久裝片的觀察。

　　五、反思：

　　1、松針的葉面結(jié)構(gòu)是什么樣的？

　　2、動物細胞的結(jié)構(gòu)是什么樣的？與植物細胞又什么不同？

　　3、顯微鏡的物鏡倍數(shù)愈大，視野的亮度如何？物體的大小如何？

　　4、如何調(diào)節(jié)焦距？

　　5、如何才能使切片盡量的薄？切片的厚薄對顯微鏡下觀察的效果有什么影響。

　　微生物實驗報告 11

　　一、實驗?zāi)康模?/strong>

　　1、掌握顯示細胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。

　　2、了解細胞凋亡的生物學(xué)意義

　　3、掌握凋亡細胞的形態(tài)學(xué)檢測方法

　　二、實驗原理：

　　1、細胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物，用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本，細胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍色的聯(lián)苯胺藍，進而變?yōu)樽厣�產(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產(chǎn)物藍色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的，無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。

　　2、細胞凋亡是指細胞在生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的.、高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。

　　3、凋亡細胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小，細胞質(zhì)濃縮;細胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體;根據(jù)細胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進行顯微觀察是檢測細胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。

　　三、實驗步驟：

　　細胞中過氧化物酶的顯示

　　1、在載片上滴一滴PBS緩沖液；

　　2、取骨髓細胞：用斷頸法處死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剝出后肢股骨，剪開股骨一端，用牙簽尖的一端插入剪開的小孔中，摳取少許骨髓細胞置滴有PBS的載片上；

　　3、涂片：用另一玻片將骨髓細胞沿一個方向涂布推開，室溫晾干；

　　4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸銅液，以蓋滿涂片為宜，處理30秒-1分鐘。

　　5、傾去硫酸銅液，直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘（以蓋滿涂片為宜）6、清水沖洗，番紅復(fù)染2min。

　　7、鏡檢：清水沖洗，室溫晾干，先低倍鏡下觀察，后換高倍鏡下觀察（油鏡100×）

　　細胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測與觀察吉姆薩染色:

　　1、取細胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細胞面朝上)

　　2、生理鹽水輕輕漂洗細胞3、95%乙醇固定5min

　　4、PBS緩沖液洗2次

　　5、吉姆薩染色液染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液

　　7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。吖啶橙染色:

　　1、取細胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細胞面朝上)

　　2、生理鹽水輕輕漂洗細胞

　　3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS緩沖液洗2次每次1min

　　5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液

　　6、選用藍光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。

　　四、結(jié)果與分析：

　　1、根據(jù)隨機選擇的幾個視野的統(tǒng)計，該樣品的細胞凋亡率=227/506×100=44.9

　　Hela細胞凋亡過程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化（吖啶橙染色）

　　五、思考題：

　　1、細胞凋亡的調(diào)控機制

　　細胞凋亡是一個受基因調(diào)控、眾多細胞膜受體和胞漿蛋白參與的細胞主動自殺過程，其觸發(fā)因素多種多樣，包括細胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對細胞凋亡的調(diào)控。

　　2、細胞凋亡的特征

　　凋亡細胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小，細胞質(zhì)濃縮;細胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。

　　3、研究細胞凋亡的方法

　　定性的研究方法：常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察（普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）

　　定量或半定量的研究方法：各種流式細胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。

　　微生物實驗報告 12

　　一、【實驗?zāi)康摹?/strong>

　　1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的原理和方法。

　　2、學(xué)習(xí)并掌握凝膠電泳進行DNA的分離純化的實驗原理。

　　3、學(xué)習(xí)并掌握凝膠的制備及電泳方法。

　　4、學(xué)習(xí)并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。

　　二、【實驗原理】

　　1、質(zhì)粒DNA的制備方法

　　質(zhì)粒（Plasmid）是獨立存在于染色體外、能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子，分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中，但在細菌細胞中含量最多。細菌質(zhì)粒大小介于1～200Kb之間，是應(yīng)用最多的質(zhì)粒類群，在細菌細胞內(nèi)它們利用宿主細胞的復(fù)制機構(gòu)合成質(zhì)粒自身的DNA。

　　質(zhì)粒DNA的制備包括3個步驟：

　　①培養(yǎng)細菌，使質(zhì)粒DNA大量擴增；

　　②收集和裂解細菌

　　③分離和純化質(zhì)粒DNA。主要方法包括：堿裂解法：0.2molNaOH+1%SDS；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；SDS裂解法：10%SDS，一般用于質(zhì)粒大量提取。在實際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點以及質(zhì)粒DNA的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。

　　2、質(zhì)粒DNA的提取——堿變性提取法

　　在細菌細胞中，染色體DNA和質(zhì)粒DNA均被釋放出來，但是兩者變性與復(fù)性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達12.0的堿性溶液中，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性；共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學(xué)上是相互纏繞的。當(dāng)用pH值4.6的KAc（NaAc）高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時，變性的質(zhì)粒DNA可恢復(fù)原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中；但染色體DNA不能復(fù)性，而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心，與復(fù)性的溶于溶液的質(zhì)粒DNA分離。溶于上清液的質(zhì)粒DNA，可用無水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質(zhì)類似，乙醇沉淀

　　DNA的同時，也伴隨著RNA沉淀，可利用RNaseA將RNA降解。質(zhì)粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白，可通過酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質(zhì)粒DNA。

　　3、凝膠電泳進行DNA分離純化

　　電泳（electrophoresis）是帶電物質(zhì)在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定pH條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質(zhì)，它具有分子篩效應(yīng)。含有電解液的凝膠在電場中，其中的電離子會發(fā)生移動，移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段，是分子生物學(xué)的核心技術(shù)之一。

　　凝膠電泳技術(shù)操作簡單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidium bromide，EB）或SYBR Gold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話，這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實驗。

　　分子生物學(xué)中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構(gòu)型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高，長度上相差1bp或質(zhì)量上相差0.1%的DNA都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行DNA序列分析的分子基礎(chǔ)。雖然它能很快地進行電泳，并能容納較大的DNA上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物，由β—D—吡喃半乳糖與3，6—脫水—L—吡喃半乳糖組成，相對分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬bp），小片段DNA（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測定DNA的相對分子質(zhì)量，分離經(jīng)限制酶水解的DNA的片段，進一步純化DNA等。

　　瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負電荷，在電場中向正極移動。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素：樣品DNA分子的大小、DNA分子的構(gòu)象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。

　　三、【實驗材料】

　　1、實驗儀器

　　培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1.5ml塑料離心管（Eppendorf管）、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。

　　2、實驗試劑

　　LB培養(yǎng)基，抗生素Ap（氨芐青霉素），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，RNaseA母液，TE緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（PCI）混合液，預(yù)冷無水乙醇，TAE電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（EB），DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物DNA Marker λ/Hind Ⅲ，5mol/L pH 5.2的醋酸鈉。

　　四、【實驗步驟】

　　1、準(zhǔn)備實驗

　　配制LB液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配LB固體培養(yǎng)基；準(zhǔn)備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1.5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個 ，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。

　　2、菌體培養(yǎng)

　　在含有Ap的LB平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒pUC19的E。coli DH5單菌落，接種于20mlLB液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加Ap100ul

　　（100ug/ml），質(zhì)粒pUC19具有Ap抗性基因，使得帶有pUC19的質(zhì)粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質(zhì)較多，然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)接于50mlLB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入Ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數(shù)生長期后期，生長速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質(zhì)少，適合提取質(zhì)粒。

　　3、質(zhì)粒提取

　　（1）稱量空的50ml離心管的重量為14.331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細胞。

　　（2）向離心管中懸滴加入5ml冰預(yù)冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14.437g，則菌體質(zhì)量為106mg。

　　（3）洗滌后每100mg菌體應(yīng)加入冰預(yù)冷的溶液Ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液Ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使

　　溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細胞提前破裂，防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，可抑制DNase的活性，抑制微生物的生長。Tris—Cl溶液提供適當(dāng)?shù)膒H。

　　（4） 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml（與溶液Ⅰ對應(yīng)），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化導(dǎo)致細胞溶解。同時，強堿性使染色體DNA、質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)變性；SDS為下一步沉淀做鋪墊。

　　（5）按比例加入冰預(yù)冷的溶液Ⅲ1.5ml（與溶液Ⅰ、Ⅱ?qū)��?yīng)），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH，因為長時間的堿性條件會打斷基因組DNA，只要是50－100 kb大小的片斷，就不能再被PDS共沉淀。同時變性的質(zhì)粒DNA復(fù)性。反應(yīng)形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。

　　（6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側(cè)，用移液槍將上清液轉(zhuǎn)移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻，加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng)，對DNA很安全，因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負電荷的'，加一定濃度的NaAc或NaCl，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。

　　（7） 以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。

　　（8）以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標(biāo)記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色，隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質(zhì)粒，要在離心管上標(biāo)記質(zhì)粒所在位置。

　　（9）將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉(zhuǎn)移到一個Eppendorf管中。TE是pH緩沖液，為DNA提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護堿基對。同時含有EDTA是二價陽離子的螯合劑，抑制DNA酶作用。

　　4、質(zhì)粒純化

　　（1）Eppendorf管中加入RNase A（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0.5—1h

　　（2）將上述的溶液平均分配到2個1.5ml的微量離心管中，每管0.5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）Tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經(jīng)Tris飽和后的，顯黃色。苯

　　酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無色，在中間產(chǎn)生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質(zhì)。

　　（3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑，但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會影響DNA的酶切，它本身易被氧化，會損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質(zhì)粒中的脂類，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫，有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質(zhì)的存在。

　　（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中，得上清液400ul。

　　（5）向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻，再加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。

　　（6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到DNA沉淀，為白色。

　　（7）向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。

　　（8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。

　　5、質(zhì)粒檢測

　　（1）稱取0.4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標(biāo)好液面位置，加入40ml的1×TAE電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。

　　（2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×TAE 電泳緩沖液，至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。

　　（3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍色）的移動。

　　（4） 把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進EB溶液中進行染色，完全浸泡約5min。

　　（5）凝膠成像儀觀察。

　　五、【注意事項】

　　（1）滴加溶液II時，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動作要快，因為強堿在溶液中停留時間不能過長，否則會破壞質(zhì)粒DNA。

　　（2）加入溶液III后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液III中和強堿使質(zhì)粒復(fù)性，不可劇烈震蕩， 防止染色體DNA斷裂，應(yīng)該上下顛倒離心管，使其混勻。

　　微生物實驗報告 13

　　目的要求

　　1、練習(xí)使用顯微鏡，學(xué)會規(guī)范的操作方法。

　　2、能夠獨立操作顯微鏡。

　　3、能夠?qū)��?biāo)本移動到視野中央，并看到清晰的圖象。材料用具：

　　顯微鏡、e字玻片（寫有上字的玻片）、動植物永久玻片、擦鏡紙、紗布

　　方法和步驟

　　一、取鏡和安放

　　1．右手握住鏡臂，左手托住鏡座。

　　2．把顯微鏡放在實驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。

　　二、對光

　　3．轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的'距離)。

　　4．把一個較大的光圈對準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開，便于以后同時畫圖)。轉(zhuǎn)動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡，可以看到白亮的視野。

　　三、觀察

　　5．把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“e”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對通光孔的中心。

　　6．轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。

　　7．左眼向目鏡內(nèi)看，同時反方向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動細準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

　　注意事項

　　1、注意安全，不要損傷顯微鏡、目鏡和物鏡。

　　2、材料對準(zhǔn)通光孔，用壓片夾將玻片壓好。

　　3、下降鏡筒時，不要注視目鏡，一定要注視物鏡，以免損壞玻片標(biāo)本和物鏡鏡頭。

　　4、取下玻片標(biāo)本時要小心;

　　5、實驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，把兩個物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進鏡箱里，送回原處。

　　微生物實驗報告 14

　　一、實驗?zāi)康?/strong>

　　（一）掌握一般培養(yǎng)基的制備原理及要求，掌握培養(yǎng)基酸堿度的測定，熟悉一般培養(yǎng)基的制備過程和各種器皿滅菌方法。

　　（二）掌握細菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法，掌握細菌抹片的制備方法和革蘭氏染色法及油鏡的使用方法，并認(rèn)識革蘭氏染色的反應(yīng)特性。

　　（三）掌握學(xué)習(xí)用微生物學(xué)原理診斷疾病的一般方法及步驟。

　　二、實驗用品

　　（一）器材

　　量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號筆、接種環(huán)、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡

　　（二）試劑及材料

　　肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.01%結(jié)晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸餾水、小白鼠、病豬內(nèi)臟

　　三、實驗步驟

　　（一）培養(yǎng)基的制備

　　1、麥康凱培養(yǎng)基

　　（1）組成：蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖10g、0.01%結(jié)晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5ml、蒸餾水1000ml

　　（2）方法：將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)ph至7.2。將瓊脂加入600ml蒸餾水中，并加入乳糖，加熱熔化。將兩液混合，分裝于燒瓶內(nèi)，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌

　　15~30min。待冷卻至50~ 55℃時，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。

　　注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后需經(jīng)高壓滅菌。

　　2、血清平板

　　（1）組成：營養(yǎng)瓊脂、牛血清

　　（2）方法：將滅菌的營養(yǎng)瓊脂加熱熔化，冷卻至45~50℃時，加入牛血清，并混勻，傾注平板。

　　注：不得將牛血清一并加入后再滅菌。

　　3、lb培養(yǎng)基

　　（1）組成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g

　　（2）方法：在950ml蒸餾水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉，調(diào)節(jié)ph至7.4，加熱熔化，分裝于瓶中，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時，傾注平板。

　　4、液體培養(yǎng)基（在lb培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，裝入大試劑瓶中，不加瓊脂，不分裝）

　　（二）病料取材

　　在病豬死亡后，首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在，未發(fā)現(xiàn)，則立即用消毒的器械對其進行生理解剖，觀察其病理特征現(xiàn)象，取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組織物，并注意組織的完整性，用儲物袋密封保存。

　　（三）細菌粗培養(yǎng)

　　1、消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實驗手套，再用消毒水對無菌操作臺內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對待用器械進行火焰滅菌。

　　2、接種

　　（1）在無菌操作臺酒精燈旁打開用儲物袋密封保存的病料，先左手持鑷子右手持剪刀，把病料剪出一個小口。

　　（2）右手持滅過菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開約20左右，然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉(zhuǎn)一下后，再用劃線接種的方法接種到一個血清平板上。

　　（3）用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標(biāo)記，并將平板倒放。

　　以此方法，分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上，各接種2個血清平板。

　　3、培養(yǎng)：將接種好的血清平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時。注：劃線接種時盡量劃開，以保證長出單個菌落，且劃線時接種環(huán)應(yīng)盡量傾斜，以免劃破培養(yǎng)基（后同）；待接種完畢后熄滅無菌操作臺內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無菌操作臺窗口，打開無菌操作臺內(nèi)的紫外燈。

　　（四）細菌純培養(yǎng)

　　1、菌落特征判斷

　　待粗培養(yǎng)的細菌培養(yǎng)24小時后，取出用放大鏡觀察記錄單個小菌落的形態(tài)特征并用實驗報告紙記錄好，并在平板底部上做好觀察標(biāo)記，其形態(tài)特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構(gòu)造、隆起度、濕潤度、透明度、顏色等。

　　2、取單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢

　　（1）取干凈的載玻片，用記號筆在其一面做好正反面標(biāo)記，再在載玻片另一面中央滴上一小滴蒸餾水。

　　（2）將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷卻后，在酒精燈旁從標(biāo)記的單個小菌落中取少許細菌置于蒸餾水中混勻（同時蓋好平板倒扣置于一旁），用接種環(huán)涂成直徑約1.5cm的菌膜，再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細菌，待冷卻進行染色。

　　（3）先滴加草酸結(jié)晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革蘭氏碘液溶液染色1~2min，再水洗；隨后滴加95%的酒精脫色30~60s，再水洗；最后滴加稀釋的品紅進行復(fù)染30~60s，再水洗；待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。

　　（4）將干燥的載玻片放在1000倍油鏡下，滴加一滴松柏油進行鏡檢，觀察其形態(tài)特征，判斷細菌的種屬。

　　3、細菌接種培養(yǎng)

　　（1）消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實驗手套，再用消毒水對無菌操作臺內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對待用器械進行火焰滅菌。

　　（2）接種：右手持滅過菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開約20左右，然后將接種環(huán)插入揭開的平板口內(nèi)蘸去一下鏡檢標(biāo)記的小菌落，再用劃線接種的'方法接種到一個血清平板、lb平板或麥康凱平板上。并用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、菌種、部位等標(biāo)記，將平板倒放。

　　（3）將接種好的平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時。

　　注：油鏡用完后應(yīng)立即清理物鏡上的松柏油；劃線接種時盡量劃開，以保證長出單個菌落；待接種完畢后熄滅無菌操作臺內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無菌操作臺窗口，打開無菌操作臺內(nèi)的紫外燈。

　　（五）菌液的制備

　　1、鏡檢：用革蘭氏染色法在1000倍油鏡下鏡檢，觀察并記錄是否為純培養(yǎng)的細菌。

　　2、分裝液體培養(yǎng)基：先對無菌操作臺及需要使用的器械進行消毒滅菌，然后用鉗子揭開一個空試劑瓶，用傾倒的方法在酒精燈旁從液體培養(yǎng)基大試劑瓶中分裝于空試劑瓶內(nèi)，并立即蓋上液體培養(yǎng)基大試劑瓶瓶塞。

　　3、接種：右手持接種環(huán)，用火焰對其進行滅菌，待冷卻后，取出純培養(yǎng)的平板，在無菌操作臺內(nèi)酒精燈旁，蘸去少許細菌，左手傾斜液體培養(yǎng)基，將接種環(huán)，伸入液體培養(yǎng)基內(nèi)攪動，然后取出對接種火焰環(huán)滅菌，并用滅菌的包裝紙捆綁好后，用記號筆做好相應(yīng)標(biāo)記，置于一旁。

　　4、培養(yǎng)搖菌：將接種好的液體培養(yǎng)基置于水浴培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。注：分裝一個培養(yǎng)基就接種一個培養(yǎng)基，不得全部分裝完后再一個一個接種。

　　（六）小鼠致病性實驗

　　1、保定：選擇健康的青壯年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋轉(zhuǎn)數(shù)周讓其眩暈，然后用左手的拇指和食指捏住兩耳及頭部皮膚，并翻轉(zhuǎn)左手，使其頭部朝下，以達到內(nèi)臟前移的目的。

　　2、接種：先用酒精棉球蘸取酒精對注射部位擦洗消毒，再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。

　　3、觀察：將接種的小白鼠放在適宜的環(huán)境下生活，并在鼠籠處用記號筆標(biāo)記好接種時間、菌種等。

　　4、再培養(yǎng)鑒定：待小白鼠死亡后，對其進行解剖，觀察其內(nèi)臟病變情況，并取肝臟直接涂在相應(yīng)培養(yǎng)基上，在適宜條件下反向培養(yǎng)24小時后，取菌落細菌進行鏡檢觀察判斷。

　　注：在注射小白鼠2小時候需要觀察小白鼠是否因注射時傷害到內(nèi)臟而死亡。

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