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生物試劑方

時(shí)間：2023-03-02 21:19:21 生物/化工/環(huán)保/能源我要投稿

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生物試劑方

　　生物試劑篇一：生物試劑配方

生物試劑方

　　生物試劑配方

　　一，健那綠：1,）1%健那綠：0.5g+50ml生理鹽水

　　2）1/5000健那綠染液：取1%的健那綠1ml加入49ml生理鹽水=20ml健那綠+980mll生理鹽水

　　二，吡羅紅甲基綠：A液：1）甲基綠2g+98ml水

　　2）吡羅紅G5g+95ml水

　　3）取60ml甲基綠與20ml吡羅紅加入到160ml水，放入棕色瓶備用。

　　B液：1）乙酸鈉16.4g,加水至1000ml

　　2）乙酸12ml，加水至1000ml

　　3)乙酸鈉溶液300ml+稀乙酸200ml+500ml水

　　吡羅紅甲基綠試劑：A液200ml+B液800ml

　　三．牙簽消毒：KMno4溶液，取0.1g~0.5g高猛酸鉀溶于100蒸餾水中

　　四．生理鹽水：0.9%：取9g鹽溶于1000ml水中

　　五．30%蔗糖溶液：300g蔗糖加水至1000ml

　　六．1g龍膽紫溶于100ml水，稀釋到500ml，存于棕色瓶中。

　　七．斐林試劑：甲液：100g氫氧化鈉(NaOH)加水至1000ml

　　乙液：50gCuSO4加水至1000ml

　　蘇丹：1g干粉加95%酒精至1000ml

　　雙縮脲：A液：同甲液B液：10gCuSO4加水至1000ml

　　八．淀粉酶：2%：20g酶+980ml水

　　淀粉3%：30g淀粉+970ml水

　　蔗糖3%：30g糖+970ml水

　　過(guò)氧化氫（H2O2）3%：100ml（30%H2O2）+900ml水

　　3.5%FeCl3：35g(Fecl3)+965ml水

　　15%HCL：202ml(37%HCL)加水至500ml

　　九．層析液：石油醚+丙酮+苯20:2:1=1000:100:50

　　生物試劑篇二：生物試劑配制標(biāo)準(zhǔn)操作流程

　　生物試劑配制標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

　　1.目的

　　確保試劑配制準(zhǔn)確、有效。

　　2.范圍

　　試劑研發(fā)部芯片組所用的生物試劑。

　　3.器材與試劑

　　3.1.器材

　　電子天平，稱量匙，稱量紙，移液槍，渦旋混合器，掌上離心機(jī)，磁力攪拌器，轉(zhuǎn)子，玻璃棒，1L容量瓶，50ml容量瓶，100ml容量瓶，10ml容量瓶，1L燒杯，100ml燒杯，10ml燒杯，100ml量筒，10ml量筒，0.2μm孔徑濾膜，1ml注射器，1.5ml離心管。3.2.試劑

　　EDC：1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimideHydrochloride，1-乙基-3-(3-甲基氨基丙基)碳化二亞胺，(191.7)，密封、干燥、-20℃避光密閉保存。MES：2-(N-Morpholino)ethanesulfonicacid，2-(N-嗎啉代)乙磺酸，(213.2)，室溫干燥密閉保存。

　　Formamide：甲酰胺，(45.041)，4℃密閉保存。

　　10g/mlSalmonDNA：鮭魚精DNA，室溫干燥密閉保存。

　　SDS：dodecylsulfate，十二烷基硫酸鈉，(288)，室溫干燥密閉保存。1mol/LNaOH：氫氧化鈉，(40.01)，室溫密閉干燥保存。

　　檸檬酸三鈉·2H2O：Trisodiumcitrate，dihydrate，(294.1)，室溫干燥密閉保存。NaCl：氯化鈉，(58.44)，室溫干燥密閉保存。1mol/LHCl：鹽酸，(36.5)，室溫密閉保存。

　　4.程序

　　4.1.MES(20mM，2×)配制：

　　4.1.1.配制0.1MMES母液

　　4.1.1.1.在干燥環(huán)境中用電子天平稱取1.21524gMES于干凈的100ml燒杯中。4.1.1.2.量取30ml蒸餾水溶解MES固體，加入數(shù)滴1mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至5.1。4.1.1.3.把溶液轉(zhuǎn)移到已經(jīng)檢查過(guò)的50ml容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉(zhuǎn)移到容量瓶中，輕輕搖動(dòng)，用玻璃棒引流，加蒸餾水定容至50ml。

　　4.1.2.配制20mMMES

　　4.1.2.1.于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)稀釋0.1MMES母液至20mM(2ml0.1M母液+8ml無(wú)菌水，即2×)，分裝至1.5ml離心管，全程無(wú)菌過(guò)濾，-20℃保存。

　　4.2.SSC洗液配制：

　　4.2.1.20×SSC(1L)洗液配制：

　　4.2.1.1.在干燥環(huán)境中用電子天平稱取175.3g(3M)NaCl和88.2g(0.3M)檸檬酸三鈉·2H2O于1L的燒杯中。

　　4.2.1.2.量取800ml去離子水溶解NaCl與檸檬酸三鈉·2H2O，加入數(shù)滴1mol/LNaOH溶液調(diào)pH值至7.0。

　　4.2.1.3.把溶液轉(zhuǎn)移到已經(jīng)檢查過(guò)的1L容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉(zhuǎn)移到容量瓶中，輕輕搖動(dòng)，用玻璃棒引流，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌，室溫密閉存放。4.2.2.10%SDS(100ml)配制：

　　4.2.2.1.在干燥環(huán)境中用電子天平稱取10gSDS。4.2.2.2.量取80ml去離子水加熱溶解10gSDS。

　　4.2.2.3.待溶液冷卻至室溫，加入數(shù)滴1mol/LHCl調(diào)pH至7.2。

　　4.2.2.4.把溶液轉(zhuǎn)移到已經(jīng)檢查過(guò)的100ml容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉(zhuǎn)移到容量瓶中，輕輕搖動(dòng)，用玻璃棒引流，加水定容至100ml，室溫密閉存放。4.2.3.2×SSC(1L)洗液配制：

　　4.2.3.2.加入800ml去離子水加熱溶解。

　　4.2.3.3.待溶液冷卻至室溫，加入數(shù)滴1mol/LHCl調(diào)pH至7.0-7.2。

　　4.2.3.4.把溶液轉(zhuǎn)移到經(jīng)檢查過(guò)的1L容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，洗滌液也轉(zhuǎn)移到容量瓶中，輕輕搖動(dòng)，用玻璃棒引流，加水定容至1L，室溫密閉存放。

　　4.2.4.0.2×SSC(1L)洗液配制：

　　4.2.4.1.量取10ml20×SSC與10ml10%SDS于1L的燒杯中。4.2.4.2.加入800ml去離子水加熱溶解。

　　4.2.4.3.待溶液冷卻至室溫，加入數(shù)滴1mol/LHCl調(diào)pH至7.0-7.2。

　　4.3.EDC(10×)配制：

　　4.3.1.在干燥環(huán)境中用電子天平精密稱取適量的EDC粉末于離心管中。4.3.2.按EDC(mg)：滅菌水(ml)=1：5的比例向裝有EDC粉末的離心管中精確加入滅菌水。

　　4.3.3.將裝有EDC粉末和滅菌水的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻，然后于離心機(jī)上離心，室溫放置(現(xiàn)用現(xiàn)配)。

　　4.4.HB(2×)配制：

　　4.4.1.方法一：

　　4.4.1.1.用適當(dāng)規(guī)格的移液槍按以下體系依次準(zhǔn)確移取試劑于離心管中。

　　20×SSC10%SDSFormamide

　　10mg/mlSalmonDNA滅菌水

　　2.5ml200μl5ml100ul2.2ml

　　4.4.1.2.將裝有樣品的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻，然后于離心機(jī)上離心。

　　4.4.1.3.于無(wú)菌操作臺(tái)分裝HB至1.5ml離心管中，-20℃保存?zhèn)溆谩?.4.2.方法二：

　　4.4.2.1.在干燥環(huán)境下用電子天平精確稱取0.8765gNaCl和0.441g檸檬酸三鈉·2H2O于10ml燒杯中，加入不超過(guò)5ml(約3ml)滅菌水，用玻璃棒攪拌，待溶解后調(diào)節(jié)PH至7.0。

　　4.4.2.2.在干燥環(huán)境下用電子天平精確稱取0.02gSDS和0.001g鮭魚精DNA于燒杯中。

　　4.4.2.3.用1000ul移液槍準(zhǔn)確移取5mlFormimade于燒杯中，玻璃棒攪拌均勻。4.4.2.4.將燒杯中的液體轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶，用少量滅菌水洗滌燒杯和玻璃棒2~3次，洗滌液也轉(zhuǎn)移至容量瓶中，輕輕搖動(dòng)，用玻璃棒引流，加滅菌水定容至10ml。

　　4.4.2.5.于無(wú)菌操作臺(tái)分裝HB至1.5ml離心管中，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

　　4.5.模板點(diǎn)樣液配制

　　4.5.1.按以下體系移取試劑于離心管中。

　　EDCMESDNA(100μM)H2OTotal

　　1μl5μl1μl3μl10μl

　　DNA終濃度10μM。

　　4.5.2.將裝有樣品的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻，然后于離心機(jī)上離心，室溫放置待用。

　　生物試劑篇三：常用生物試劑配制方法

　　常用生物試劑配制方法（buffer）

　　實(shí)驗(yàn)室各種緩沖液的配方

　　電泳緩沖液

　　50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液終濃度配制1L溶液

　　成分各成分的用量

　　2mol/LTris堿242g

　　1mol/L冰乙酸57.1ml

　　EDTA（pH＝8.0）18.622g（200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0））水補(bǔ)足1L

　　5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液

　　成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量

　　445mmol/LTris堿54g

　　445mmol/L硼酸鹽27.5g硼酸

　　10mmol/LEDTA20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）水補(bǔ)足1L

　　染料

　　1％溴酚藍(lán)（bromophenolblue）

　　加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

　　1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

　　溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

　　10mg/ml的溴化乙錠（ethidiumbromide）

　　小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。

　　凝膠上樣液（gelloadingsolutions）

　　6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）

　　成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

　　0.3N氫氧化鈉300ul10N氫氧化鈉6mmol/LEDTA120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

　　18％聚蔗糖（400型）1.8g

　　0.15％溴甲酚綠15mg

　　0.25％二甲苯青FF25mg

　　水補(bǔ)足到10ml

　　6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　　成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

　　0.15％溴酚藍(lán)1.5ml1％溴酚藍(lán)

　　0.15％二甲苯青FF1.5ml1％二甲苯青FF

　　5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

　　15％聚蔗糖（400型）1.5g

　　水補(bǔ)足到10ml

　　6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　　成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

　　0.25％溴酚藍(lán)2.5ml1％溴酚藍(lán)

　　0.25％二甲苯青FF2.5ml1％二甲苯青FF

　　15％聚蔗糖（400型）1.5g

　　水補(bǔ)足到10ml

　　6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）

　　成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

　　0.15％溴酚藍(lán)1.5ml1％溴酚藍(lán)

　　0.15％二甲苯青FF1.5ml1％二甲苯青FF

　　5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

　　50％甘油3ml

　　水3.9ml

　　6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　　成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

　　0.15％溴酚藍(lán)1.5ml1％溴酚藍(lán)

　　0.15％二甲苯青FF1.5ml1％二甲苯青FF

　　5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

　　40％聚蔗糖4g

　　水補(bǔ)足到10ml

　　10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）

　　成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量

　　0.2％溴酚藍(lán)20mg

　　0.2％二甲苯青FF20mg

　　200mmol/LEDTA4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)

　　0.1％SDS100ul10％SDS

　　50％甘油5ml

　　水補(bǔ)足到10ml

　　0.5mol/LEDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH(調(diào)節(jié)pH＝8.0)，并溶于水中，定容至1L。

　　0.5mol/LEDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2"6H2O于足量的水中，定容到100ml。

　　10mg/mlRnase（無(wú)DNase）（DNase－freeRNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于

　　1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）

　　10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

　　10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

　　10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量

　　0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L貯液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L貯液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L貯液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L貯液,5mmol/L鹽酸亞精胺（可選）:50ul1mmol/L貯液,0.5mg/mlBSA（組分V）（可選）:0.5ml10mg/mL貯液,水:2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃。

　　DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水

　　加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15psi條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。

　　TE（用于懸浮和貯存DNA）

　　成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量

　　10mmol/LTris－HCl1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4(轉(zhuǎn)載于:mol/LEDTA200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

　　水98.8ml

　　Tris緩沖液（Tris-HClbuffer）

　　將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。

　　濃鹽酸的體積（ml）pH

　　8.69.0

　　148.8

　　218.6